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轉染試劑原理及操作方法

發布時間:2023-06-15      點擊次數:357
  轉染試劑是由它的體外轉染試劑加上一些專有的肽配制而成。與傳統的配方相比,這款運用了新的化學試劑,DNA濃縮組被顯著地釋放。主鏈上連上具有屏蔽效應的肽,用來防止被體內環境的干擾,獲得高的體內轉染效率。
 
  轉染試劑指真核細胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標志的過程。哺乳動物的轉染技術在60年代末70年代初即已引入。DNA轉染技術的發展對現代分子生物學產生了巨大的影響?;蜣D染技術不僅是研究轉基因和基因表達的重要工具,而且是目前基因治療的關鍵步驟。理想的基因轉染試劑應該具有如下特點:1.轉染;2.安全;3.低細胞毒性;4.方法簡單;5.省時、經濟。
 
  轉染試劑工作原理:脂質體帶正電,可以靠靜電作用結合到DNA的磷酸骨架上以及帶負電的細胞膜表面。使用陽離子脂質體試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物。
 
  轉染試劑操作簡單、快速,為操作者節約大量操作時間。
 
  1. 以24孔細胞板轉染實驗為例,推薦一次(即每孔)轉染實驗的低內毒素質粒DNA用量為2µg、轉染試劑用量為3~5µl(轉染試劑的zui適用量需要根據不同細胞和不同培養基來優化,但理論上不超出3~5µl范圍)。轉染實驗中使用無菌生理鹽水稀釋質粒和轉染試劑即可。
 
  2. 為獲得zui高轉染效率并盡可能降低細胞毒性,建議轉染時細胞密度控制在50~80%范圍內,而且在不影響轉染效率的前提下,盡可能減少轉染試劑的用量。
 
  3. 本品極大簡化了轉染步驟,轉染試劑和質?;旌虾鬅o需室溫靜置孵育,可直接加入含血清的細胞培養基中進行轉染,而且無需在轉染后補加血清或更換培養基。
 
  4. 如果實驗目的在于篩選抗藥性穩定細胞系,可在細胞傳代后直接進行轉染試劑實驗,從而節省了18~24小時的轉染前細胞培養時間!
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