您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術有限公司網站!
咨詢熱線

18201805506

當前位置:首頁 > 產品中心 > PCR&q-PCR > q-PCR > AN19L032Evagreen (20 × in water)

Evagreen (20 × in water)

簡要描述:Evagreen (20 × in water)是一種用于實時定量PCR(qPCR)的DNA 結合染料。該染料的諸多優點使它遠勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性,Evagreen有三個主要特點使它區別于SYBR Green I 。

  • 產品型號:AN19L032
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-02-15
  • 訪  問  量:485

相關文章

Related Articles

詳細介紹

品牌其他品牌供貨周期現貨
應用領域環保,化工,生物產業,綜合

Evagreen  ( 20 × in water )

產品描述
Evagreen 是一種用于實時定量PCR(qPCR)的DNA 結合染料。該染料的諸多優點使它遠勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性,Evagreen有三個主要特點使它區別于SYBR Green I 。
首先,Evagreen對PCR的抑制性遠小于SYBR Green I。因此,使用Evagreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。同時,Evagreen在實驗中可以使用較高的濃度,從而獲得遠強于SYBR Green I擴增信號。較高濃度的Evagreen也消除了“染料重分布"的缺陷,使Evagreen既可用于多重PCR,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲線分析(HRM)。該分析正被越來越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性,從而要求其使用濃度必須很低,因此SYBR Green I無法解決由低濃度造成的染料重分布問題,既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時,染料重分布問題也可能影響常規熔解曲線的可靠性,因為低熔點的DNA鏈可能由于這種原因而無法檢測到。    
第二,Evagreen的穩定性強。在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復凍融。與之相反,SYBR Green I不穩定而且降解后對PCR抑制性更強。
第三,Evagreen降低了細胞膜透性,因而比SYBR Green 1更加安全。獨立實驗室的測試結果顯示,Evagreen既沒有誘變性也沒有細胞毒性。相反,雖然SYBR Green I本身誘變性很弱,但它在細胞中可能抑制了正常DNA的修復機制,使其有誘變增強作用??紤]到PCR的廣泛使用,其安全性應該足夠重視。
訂購信息

產品名稱貨號規格價格
Evagreen (20 × in water)AN19L0321 mL580
Evagreen (20 × in water)AN19L0335 mL2280

產品參數
λabs/λem = 500/530 nm (結合DNA)
λabs = 471 nm (未結合DNA)
運輸與保存
藍冰運輸。4℃短期避光保存,有效期12個月;-20℃長期避光保存,有效期24個月。
使用方法
如下建立實驗體系:(僅供參考)

10× 的無Mg2+聚合酶緩沖液5 µL
50 mM MgCl22.5 µL
2 mM dNTP5 µL
20×Evagreen2.5 µL
Taq DNA polymerase1-5 units
F, R Primers0.1-0.5 µM
模板適量
dH2Oto a final volume of 50 µL



實驗目的
實時定量PCR檢測20× Evagreen
主要試劑
1. Prime
hβ-actin:
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
2. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
3. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
4. BSA: Sigma(A7030)
5. 10 mM dNTPs: Takara(4019)
實驗方案
1. 配制2× Evagreen Buffer

Evagreen Buffer
組分濃度體積(μL)
1 M Tris HCl pH8.550 mM5
500 mM (NH4)2SO420 mM4
50 mM MgCl27 mM14
50% glycerol2.5%5
DMSO10 %10
20× Evagreen10
10 mM dNTPs0.4 mM4
2 % Tween200.03 %1.5
1 mg/mL BSA22 ug/mL2.2
H2O/44.3
Total volume/100

2. 配制 q-PCR反應體系

成分20 μL/體系/管反應
10 μM primers1 μL
模板適量
HS Taq DNA 酶 (5 U/μL)0.2 μL
Evagreen buffer10 μL
H2O定容至20 μL

注】: DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同種類的 DNA模板中含有的靶基因的拷貝數不同,必要時可進行梯度稀釋,確定合適的 DNA 模板添加量。cDNA作為模板時的添加量不要超過 PCR 反應液總體積的 10%。引物終濃度一般控制在0.1-0.5 μM范圍內。
3. 實驗分組:標準對照樣品孔(陽性對照)、檢測樣品孔、空白對照孔(陰性對照)共三組,同時進行檢測,分別進行三次平行實驗。
4. 混勻離心、上機進行熒光定量PCR(儀器為Roche:LC96)。
PCR程序:


溫度時間
Step 195℃2 min
Step 295℃5 sec
Step 360℃30 sec
Step 2~3,重復 45個循環
熔解曲線Tm值 57℃~99℃

5. 保存數據,判斷樣本質量:
A.檢測樣品與標準品之間的Ct值差
B.檢測樣品與標準品之間的熒光強度差
檢測結果需達到:以上兩組檢測指標無顯著性差異
注意事項

  1. 產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

相關產品推薦
EZ PCR直擴鼠尾裂解液(貨號:AN11L227)
PikoGreen dsDNA 定量試劑盒(超敏)(貨號:AN54L038)

其他產品簡介
快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)(貨號:AC05L033
上海李記生物快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)可適應于絕大部分腫瘤細胞和常規細胞,部分干細胞李記已測試細胞種類請關注),凍存細胞可在 -80℃ 長期保存6年)。不含動物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分,提高細胞存活率和活力,亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。


公司簡介
李記生物-專注高效轉染試劑
感謝您對于李記生物一直以來的關注和支持!希望在未來,李記能一直伴您前行!
上海李記生物成立于2015年,坐落于大美浦東。是集研發、生產、銷售為一體的國產生物試劑公司,目前擁有多名復旦、交大、同濟博士的研發團隊,和一支年輕、專業敢拼的銷售團隊,以及在全國40余座城市鋪設多名授權代理商體系。
李記生物試劑,鑄造百年經典!我們將不斷致力于生物實驗試劑的創新研發、高質生產、貼心服務,為科研向前略盡綿薄之力!
李記生物-WB技術服務
我們于2021年11月正式開始對外承接western blot服務,我們有超過10年的WB實驗經驗的超專業團隊。用戶只需提供樣本和一抗(李記可幫忙代購),我們將為您提供完整的實驗步驟和結果,提供專業的數據分析,提供電子版掃膜結果。

 

 

 

產品咨詢

留言框

  • 產品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
掃一掃,關注微信
地址:上海市浦東新區紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2023 和元李記(上海)生物技術有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
欧美国产精品久久久乱码,MD传媒破解版APP免费版,国产精品乱码一区二三区,与黑人大黑机巴做爰A片