您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術有限公司網站!
咨詢熱線

18616108692

當前位置:首頁 > 產品中心 > 細胞生物學 > 細胞轉染 > AC04L605EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒

EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒

簡要描述:和元李記EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒(EZ Trans Lentiviral Infection Kit),包含:慢病毒包裝質粒、對照質粒、轉染試劑(EZ Trans Regent)、慢病毒濃縮液、慢病毒感染增強劑等必要組份,可一站式高效完成病毒包裝到感染細胞的全部過程。

  • 產品型號:AC04L605
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-04-18
  • 訪  問  量:817

詳細介紹

品牌其他品牌貨號AC04L605/AC04L610/AC04L620
供貨周期現貨應用領域醫療衛生,環保,化工,生物產業,綜合

EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒

產品描述

和元李記EZ Trans一站式慢病毒包裝試劑盒(EZ Trans Lentiviral Infection Kit)包含:慢病毒包裝質粒、對照質粒、轉染試劑(EZ Trans Regent)、慢病毒濃縮液、慢病毒感染增強劑等必要組份,可一站式高效完成病毒包裝到感染細胞的全部過程。和元李記慢病毒包裝試劑盒(Lentiviral Infection Kit)提供足量、優質的對照質粒和包裝質粒,省去實驗人員抽提質粒的工作可快速包裝病毒感染細胞。

和元李記慢病毒載體表達系統由pLenti慢病毒載體和Lentiviral Mix質粒組成。pLenti慢載體中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他輔助元件,表達框為U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro,含綠色熒光和puro真核抗性??蛻艨梢愿鶕煌膶嶒災康尼槍lenti載體改造用于啟動子、基因功能功能研究,穩定株篩選等。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需原件,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統。

訂購信息

產品名稱

貨號

規格

EZ Trans 一站式慢病毒包裝試劑盒

AC04L605

5T

EZ Trans 一站式慢病毒包裝試劑盒

AC04L610

10T

EZ Trans 一站式慢病毒包裝試劑盒

AC04L620

20T

產品組分

貨號

規格

組分

A:對照質粒

B:包裝質粒

C:轉染試劑

D:感染增強劑

E:慢病毒濃縮液

AC04L605

5T

16μL

110μL

450μL

60μL

12.5mL

AC04L610

10T

32μL

220μL

900μL

120μL

25mL

AC04L620

20T

64μL

440μL

1800μL

240μL

50mL

運輸與保存

藍冰運輸。A、B組分-20℃保存,C、D、E組分4℃保存,有效期12個月。

使用方法

一、慢病毒包裝及純化濃縮(以10 cm培養皿為例,1皿為1T)

1.        細胞準備:293T細胞按照6×105cells/mL的細胞密度傳代到10cm培養皿中,第二天細胞長到80%-85%時準備轉染。

2.        轉染前換液:轉染前1h將需要轉染的細胞更換新鮮的DMEM,10mL/皿。

3.        轉染:

(1)       取1.5ml EP管記為質?;旌弦海ü蹵),加入500uL DMEM,16μL質粒DNA(可自行改造)和22μL包裝質粒,振蕩混勻;

(2)       另取1.5mL EP管記為轉染試劑混合液(管B),加入500uL DMEM,90μL 轉染試劑,振蕩混勻。

(3)       再將管B緩慢加入到管A中,輕輕混勻,靜置8min形成復合物,后將混合液均勻滴加到提前換好液的10cm培養皿中,輕輕混勻,放入培養箱中培養。

A管

DMEM

500μL

DNA

16μL

包裝質粒

22μL

B管

DMEM

500μL

轉染試劑

90μL

4.        轉染后換液:轉染后6-8h,將培養皿中的培養基吸掉,棄于廢液杯中,然后加入10mL 培養基(含有血清和抗生素)繼續培養。

5.        病毒收集:轉染48h后,吸取上清液于50mL 離心管中,4000rpm離心10min, 4℃,將上清液用0.45um過濾器過濾轉移到新的50mL 離心管中。此時上清液中的病毒顆??梢灾苯尤z測滴度或者感染目的細胞,如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可進行后續操作。

6.        病毒濃縮:每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒濃縮液(CAT:AC04L442),混勻,4℃放置2h,4000rpm離心30min,吸棄上清。

7.        檢測及分裝:包裝好的病毒可以直接檢測滴度,待用的病毒用EZ病毒保護液重懸分裝凍存。

二、慢病毒感染細胞(以293T細胞為例,MOI值為1)

1.         細胞鋪板:

(1)       將293T細胞配成5×104cells/mL細胞懸液,待鋪板。

(2)       將上述細胞懸液接種到6孔板,每孔鋪2mL,即1×105cells/well。

2.         感染慢病毒:

(1)       鋪好板細胞培養12-20h,準備感染。

(2)       加病毒,計算方法:(細胞數×MOI值/病毒原液滴度)×103=病毒量(μL),加病毒量見下表。

病毒原液滴度(TU/mL)

MOI =1,10組(μL)

1×107

100

1×108

10

5×108

2

1×109

1

2×109

0.5

(3)       加感染增強劑:每孔加10μL 1mg/mL 感染增強劑,最終在細胞樣品中感染增強劑的終濃度為5μg/mL,輕搖使增強劑分散均勻。

(4)       換液:感染12-20h棄去培養基,每孔加入2mL 新鮮培養基。

3.         觀察:72h后觀察細胞狀態,根據情況做開展后續實驗。(可選)

注意事項

1.         本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.         所有慢病毒操作均應盡量在BSL2*生物安全柜中進行,并佩戴一次性*口罩和手套。

3.         病毒切忌反復凍融,凍融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.         病毒儲存6個月后,建議在使用前重新測定病毒滴度。

5.         若MOI值高于20時,建議感染增強劑使用體積為8μL/mL,提高轉染效率,一些特殊細胞不能加入感染增強劑。

6.         病毒添加量與待感染細胞MOI值、病毒滴度、目的基因產物對細胞毒性有關,病毒添加量計算方法滿足大多數實驗需要,實驗人員可在此基礎上摸索最佳病毒添加量。

相關產品推薦

活性檢測CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒(貨號:AC11L054)

快速細胞凍存液(無血清、無蛋白)(貨號:AC05L033)

產品咨詢

留言框

  • 產品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細地址:

  • 補充說明:

  • 驗證碼:

    請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
微信咨詢
地址:上海市浦東新區紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2024 和元李記(上海)生物技術有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
当着夫的面被夫上司玩弄,WWW亚洲精品少妇裸乳一区二区,被黑人猛烈进出到抽搐动态图,法国空姐在线观看
<蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>